СУДЕБНО-МЕДИЦИНСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕРМЫ

Судебно-медицинская экспертиза спермы включает те же этапы, что и исследование кровяных следов: выявление следов спермы на месте происшествия, их изъятие, упаковка и направление в судебно-биологическую лабораторию; непосредственное исследование в судебно-биологической лаборатории и оформление соответствующей документации по результатам исследования.

Исследованию подлежат различного рода объекты, прежде всего, одежда потерпевших и обвиняемых, мазки и тампоны, предметы с места происшествия.

При судебно-медицинском исследовании спермы эксперту необходимо дать ответы на следующие вопросы:

  • 1. Имеется ли сперма на представленных для исследования объектах?
  • 2. Какова групповая принадлежность спермы?
  • 3. Могла ли сперма принадлежать данному конкретному лицу?

3.1. Выявление следов спермы

Поиск и исследование семенной жидкости чаще всего производится в случаях расследования половых преступлений. При этом обнаружение спермы возможно на различных предметах и объектах, но, прежде всего на одежде и теле пострадавшей, одежде и теле подозреваемого и предметах, расположенных в непосредственной близости от места совершения преступления.

Все методики выявления спермы подразделяются на предварительные (ориентировочные) и доказательные. 

Предварительные методы

  • –        визуальный осмотр,
  • –        осмотр в ультрафиолетовых лучах,
  • –        микрокристаллическая реакция (проба Флоранса)
  • –        реакция с картофельным соком,
  • –       реакция на кислую предстательную фосфатазу
  • –       проба с пикриновой кислотой

Визуальный осмотр и  поиск в ультрафиолетовых лучах применяются, в основном, для выявления следов спермы на месте происшествия.

Визуальный осмотр. В норме свежая сперма имеет вид густой, слизеобразной, белесоватой, слегка опалесцирующей непрозрачной жидкости, имеющей слабощелочную реакцию и запах зеленого каштана. У лиц в пожилом возрасте сперма имеет желтовато-серую окраску.

Внешний вид пятен спермы может быть различным в зависимости от температуры окружающей среды, влажности, степени инсоляции, характера следонесущей поверхности.

В частности, на впитывающей светлой хлопчатобумажной или льняной ткани следы спермы имеют серовато-желтоватый цвет, крахмальную плотность, неровные, фестончатые края. На темно окрашенных тканях пятна спермы выглядят как белесоватые участки с мелкими, плохо различимыми чешуйками на поверхности.

Если по своей природе поверхность предмета-носителя не способна впитывать жидкость, то пятна спермы имеют на ней вид несколько возвышающихся желтовато-белесоватых корочек, иногда с блестящей поверхностью.

Кровь, смешиваясь с семенной жидкостью, может практически полностью маскировать следы спермы.

Осмотр в ультрафиолетовых лучах. Применяется при необнаружении спермы во время первичного осмотра. С этой целью обычно используют кварцевую лампу. Свежие пятна спермы, образовавшиеся сразу после эякуляции, дают желтовато-зеленоватое свечение за счет наличия в них флавина и флавиноидов. Пятнам спермы суточной давности свойственна голубовато-белая люминесценция. Степень люминесценции уменьшается по мере старения сперменных пятен.

Флюоресценцию, свойственную сперме, могут давать и другие вещества (крахмал, слюна, выделения из влагалища, синтетические ткани). Иногда заведомые пятна спермы утрачивают способность флюоресцировать из-за смешивания с кровью, действия красителей, щелочей, кислот и др. Участки ткани, дающие характерное свечение или подозрительные на наличие спермы, обшивают нитками или помечают булавками.

Нередко следы спермы могут быть уничтожены путем застирывания или замывания. В таких случаях их невозможно обнаружить даже с помощью ультрафиолетового облучения. Тем не менее, специальное исследование позволяет выявить сперму на ткани даже после чистки или стирки её. Поэтому одежда потерпевшей и все предметы, на которых сперма визуально не определяется, но может там находиться, исходя из обстоятельств происшествия, всегда должны направляться на дальнейшую экспертизу.

Микрокристаллическая реакция (проба Флоранса). Является одним из методов предварительного исследования, так как ввиду своей неспецифичности дает лишь ориентировочную информацию для дальнейшего установления наличия спермы.

Реактив, состоящий из кристаллического йода, йодистого калия и дистиллированной воды, помещают на предметное стекло с вытяжкой из подозрительного на сперму пятна. В случае наличия спермы выпадают кристаллы коричневого или светло-коричневого цвета. Однако, не исключен отрицательный результат данной реакции при исследовании свежей или загнившей спермы. В настоящее время проба Флоранса не имеет практической значимости и представляет лишь исторический интерес.

Реакция с картофельным соком. Сущность реакции с картофельным соком основана на способности входящей в ее состав аскорбиновой кислоты агглютинировать эритроциты крови независимо от их антигенной принадлежности. Наиболее выраженная реакция наблюдается с эритроцитами I группы. В присутствии спермы тестостерон, содержащийся в спермоплазме, активно блокирует агглютинирующее действие витамина С и агглютинация  не происходит или резко тормозится, в связи с чем данная реакция также называется реакцией задержки агглютинации.

Для исследования используются сок клубней картофеля, произрастающего в северных регионах, так как он содержит большее количество витамина С, являющегося действующим началом в данной реакции.

Для проведения реакции вытяжку из пятна спермы смешивают с отмытыми эритроцитами І группы и картофельным соком. Параллельно ставится контрольная реакция картофельного сока с теми же эритроцитами, но без участия спермальной вытяжки. Результаты реакции оцениваются визуально, с помощью лупы и микроскопически. Отмечают наличие или отсутствие агглютинации в опытной пробе и ее наличие в контроле.

Необходимо отметить, что задержку агглютинации в реакции с картофельным соком может давать менструальная кровь, женское молоко. Однако следы молока очень легко отличить от следов спермы по наличию жира, для выявления которого используют окраску суданом III. Капли жира при этом имеют красновато-оранжевый цвет.

Использование в качестве реагента в реакции задержки агглютинации соков или экстрактов других растений (шиповника, лука), а также химически чистой аскорбиновой кислоты ограничено, ввиду их кислой реакции и необходимости внесения в раствор нейтрализующих буферов.

Картофельный сок изначально имеет нейтральную реакцию, поэтому используется без добавления буферной смеси.

Реакция на кислую фосфатазу. Количественное содержание и активность этого фермента в семенной жидкости значительно больше, чем в других выделениях человеческого организма. Используя специальные химические реактивы колориметрическим методом определяют присутствие и активность кислой фосфатазы в исследуемых пятнах. Однако данную пробу не следует считать специфичной, ввиду того, что многие растительные экстракты обладают высоким уровнем активности кислой фосфатазы, вместе с тем по мере старения пятен спермы, активность фермента в них снижается.

Проба с пикриновой кислотой. При взаимодействии раствора пикриновой кислоты со спермой образуются определяемые микроскопически игловидные или эллипсовидные кристаллы желтоватого цвета.

Доказательные методы

 Микроскопический метод. При микроскопическом исследовании нормальной спермы обычно обнаруживают сперматозоиды, мелкозернистые клетки яичек, клетки плоского и цилиндрического эпителия, то или иное количество лейкоцитов и иногда эритроциты, сильно преломляющие свет лецитиновые зерна, простатические зерна, амилоидные тельца.

Морфологические методики выявления сперматозоидов подразделяются на две группы:

  1. 1.                Методы избирательной окраски сперматозоидов непосредственно на предмете-носителе.
  2. 2.                Методы окраски сперматозоидов после извлечения из пятна.

Для окраски сперматозоидов непосредственно на предмете-носителе в настоящее время преимущественно используются проба Корен-Стокиса и проба Баэкки.

Проба Корен-Стокиса.  Для избирательной окраски сперматозоидов в исследуемом пятне применяется 0,5 % раствор эритрозина в 25 % растворе аммиака. Полученные препараты исследуют при помощи светового микроскопа. Доказательством наличия спермы является обнаружение целых сперматозоидов (хотя бы одного), в которых четко различимы головка, шейка, хвост или его фрагмент.

Проба Баэкки. Предполагает использование для окраски смеси двух растворов, один из которых содержит метиленовый синий, другой – кислый фуксин. При этом головки спермиев окрашиваются в красно-розовый цвет, а хвосты приобретают синюю окраску.

Вторая группа методов предполагает предварительное извлечение сперматозоидов из пятна.

Экстракцию производят 10 % раствором аммиака с длительностью экспозиции 24-48 часов. Полученную вытяжку центрифугируют и в дальнейшем готовят мазки на предметных стеклах из надосадочной жидкости и центрифугата с последующей их окраской 0,5 % раствором эритрозина.

Нередко при исследовании тампонов и мазков с содержимым влагалища сперматозоиды не обнаруживаются. Это объясняется агрессивным влиянием влагалищной микрофлоры, которая способна частично или полностью лизировать сперматозоиды.

Для установления наличия спермы в пятнах в судебно-медицинской практике широкое применение получил метод микрофлюоресценции. Сущность его основывается на способности сперматозоидов, обработанных различными флюорохромами, давать характерное свечение. Исследование производится с помощью люминесцентной микроскопии. В зависимости от используемого флюорохрома сперматозоиды будут иметь соответствующую окраску. При обработке акридином – розовую, берберин сульфатом – желтую, при использовании родамина – головки спермиев окрашиваются в зеленый цвет, хвосты – в красновато-коричневый.

Кроме того, существуют методы определения сперменного происхождения пятен при отсутствии сперматозоидов или их невыявлении с помощью стандартных методик.

Так электрофоретическим путем было установлено наличие в следах спермы специфичного изофермента ЛДГ-Х, обладающего половой и возрастной специфичностью. Этот фермент содержится в основном в сперматозоидах и в семенную плазму попадает либо путем диффузии, или вследствие их физиологической деструкции. Он не встречается в выделениях женского организма, у мужчин, страдающих азооспермией, а также в сперме подростков и пожилых мужчин. Как показали исследования, достоверная диагностика наличия спермы по изоферменту ЛДГ-Х возможна лишь в течение месяца с момента образования следа в комнатных условиях. В пятнах спермы, содержащих примесь влагалищного содержимого, отмечается более выраженный спектр изофермента ЛДГ-5.

Реакция преципитации с применением антиспермальных сывороток выявляет специфические для спермы белки: простатический в-геобулин и γ-семинопротеин, вырабатываемые предстательной железой. Этот метод позволяет диагностировать сперму в пятнах давностью до 12 лет.

Используется также хроматографический метод обнаружения белков спермы – холина и спермина.

Применение вышеуказанных методик становится наиболее актуальным в случаях азооспермии, олиго- или некроспермии, когда обнаружение сперматозоидов с помощью светового микроскопа очень затруднено.

Следует отметить, что положительный результат любого из достоверных методов дает право на вывод о присутствии спермы. Отрицательный результат позволяет утверждать лишь факт необнаружения спермы, а не её отсутствия.

3. 2. Видовое происхождение спермы

О видовом происхождении спермы можно судить по морфологической структуре сперматозоидов. В сомнительных случаях можно прибегнуть к классической реакции кольцепреципитации с видоспецифическими сыворотками или реакции иммуноэлектрофореза.

3.3. Определение групповой специфичности спермы

Как любая другая биологическая жидкость сперма содержит антигены изосерологической эритроцитарной системы АВО. Групповая принадлежность спермы определяется путем их выявления реакциями абсорбции и абсорбции-элюции (см. выше).

Прежде чем приступить к определению групповой принадлежности спермы, необходимо установить категорию выделительства.

Выделительство – это способность выделять антигены крови в составе биологических жидкостей человеческого организма (сперма, моча, пот, слюна и т.д.). Не все люди в одинаковой степени способны выделять агглютиногены свойственной им группы крови в составе спермы и других биологических жидкостей. В одной категории индивидуумов групповые антигены легко выявляются обычными количественными методиками. Представители этой категории называются «выделителями». У таких людей титр групповых антигенов в выделениях равен или даже несколько больше такового в крови. Среди европейской популяции на долю выделителей приходится 80-85% населения.

Но существует категория лиц, так называемые «невыделители», у которых агглютиногены в биологических жидкостях не открываются традиционно применяемыми количественными пробами. Это объясняется более низким титром антигенов в выделениях по сравнению с кровью. Для определения групповой принадлежности спермы у таких лиц необходимо использование более совершенных качественных методик.

Используя реакцию абсорбции-элюции, можно установить разницу в количестве выделяемых групповых антигенов, а значит и категорию выделительства того индивидуума, которому принадлежит сперма.

Определение категории выделительства имеет очень важное экспертное значение при решении вопроса о возможности происхождения спермы от конкретного лица. Так, например, в ходе исследования было установлено, что кровь лица, от которого подозревают происхождение спермы на вещественных доказательствах, относится к группе А. В исследуемом пятне спермы легко выявляется агглютиноген А. Казалось бы, нет сомнений в том, что исследуемая сперма принадлежит данному человеку. Однако подобный вывод будет неверным, если подозреваемый является «невыделителем», т.к. в этом случае обнаружение агглютиногена А в сперме будет резко затруднено. Следовательно, происхождение спермы от данного конкретного лица исключается.

Таким образом, учитывая вышеизложенное, необходимо, выяснить, является ли подозреваемый «выделителем» или «невыделителем». Категорию выделительства можно определить по системе Льюис. Это одна из разновидностей изосерологических систем, в которую входят два агглютиногена Le (a+) и Le (b+). В пределах системы Льюис выделяют три группы: Le (а + b –), Le (a– b +) и Le (а – b –). Если при исследовании этой системы выявляется комбинация Le (a+ b–), то это невыделитель, если Le (a– b+) – выделитель. Однако, в 12% случаев возможна комбинация Le (а– в–), тогда вопрос о выделительстве с помощью данного метода не решается. В таких случаях исследуют образцы слюны подэкспертного, или мочи и желчи, если это касается трупа, по системе АВО с помощью реакции абсорбции-элюции. Выделительство мужчин может быть установлено путем исследования взятой у трупа спермы.

При смешении спермы с влагалищным содержимым или слюной определение групповой принадлежности образцов спермы, взятых из влагалища или ротовой полости затруднительно. Однако с успехом можно использовать реакцию иммунофлюоресценции (РИФ). Она основана на взаимодействии флюоресцирующей гемагглютинирующей сыворотки с соответствующими антигенами и образовании комплексов антиген-антитело, визуализируемых с помощью люминесцентной микроскопии. Поскольку с помощью РИФ можно выявлять групповые субстанции в изолированных клетках (например, в отдельных сперматозоидах), данная реакция является незаменимой для определения групповой антигенной характеристики каждого биологического компонента, входящего в состав исследуемого пятна.

3. 4. Определение индивидуальной принадлежности спермы

Как и при исследовании крови, решение этого вопроса основано на явлении наследственного группоспецифического полиморфизма. Принадлежность спермы данному конкретному человеку определяют путем выявления группоспецифических антигенов по различным системам. Высокоэффективной и достоверной методикой определения индивидуальной принадлежности спермы является ПЦР.